抑菌門(mén)標(biāo)準(zhǔn)

1、抑菌自動(dòng)化智能門(mén)/消毒通道的CE測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)是EN60601-1、EN60601-1-2醫(yī)療標(biāo)準(zhǔn)FCC測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)PART15B

2、辦理流程為：填寫(xiě)檢測(cè)公司提供的申請(qǐng)表-寄樣機(jī)測(cè)試-測(cè)試通過(guò)發(fā)放合格證書(shū)，此次《抗菌木門(mén)》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)（簡(jiǎn)稱(chēng)為《標(biāo)準(zhǔn)》）的編制與實(shí)施，將對(duì)抗菌木門(mén)市場(chǎng)起到規(guī)范和引導(dǎo)作用，為抗菌木門(mén)產(chǎn)業(yè)規(guī)范發(fā)展提供參考，保障并助推產(chǎn)業(yè)有序發(fā)展，并對(duì)消費(fèi)者權(quán)益起到保護(hù)作用。

3、抗菌噴涂,抑菌潔凈 薩瓦尼抗菌系列產(chǎn)品,在生產(chǎn)制造中嚴(yán)格按照抗菌工藝標(biāo)準(zhǔn)的要求,門(mén)扇表面噴涂專(zhuān)業(yè)的無(wú)機(jī)抗菌粉末,釋放銀離子,使門(mén)扇自身具有殺菌和抑制細(xì)菌

4、技術(shù)要求：醫(yī)院專(zhuān)用門(mén)門(mén)扇：門(mén)扇厚度40mm。1、門(mén)扇表面采用5mm厚阻燃抑菌板，表面耐磨、耐劃傷、阻燃，防火等級(jí)B1級(jí)，顏色待定。

5、本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了抑菌類(lèi)產(chǎn)品的技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢測(cè)規(guī)定、標(biāo)志、包裝、

運(yùn)輸、貯存。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于當(dāng)歸、白芷、紫草、甘草、輕粉、血竭等為原料，經(jīng)水浸濃縮配

以各基質(zhì)及純化水制備而成的抑菌產(chǎn)品，用于皮膚表面抑菌防護(hù)。

6、抑菌門(mén)檢測(cè)可對(duì)纖維及紡織品、皮革、合成高分子材料等材料抗菌抑菌性能檢測(cè)。各個(gè)國(guó)家及地區(qū)有著不同的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，

產(chǎn)品需符合當(dāng)?shù)氐臉?biāo)準(zhǔn)。各個(gè)國(guó)家及地區(qū)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)如下:

一、中國(guó)常用方法:

GB/T 20944紡織品抗菌性能的評(píng)價(jià)

FZ/T 73023抗菌針織品

GB 15981消袁與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法

GB 15979一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)衛(wèi)生部《消毒與技術(shù)規(guī)范》

QB/T 2591抗菌塑料-抗菌性能試驗(yàn)方法和抗菌效果

JC/T 7、897抗菌陶瓷制品抗菌性能

抑菌塑料——抑菌性能試驗(yàn)方法和抑菌效果 QB/T 4341-2012 抑菌聚氨酯合成革 抑菌性能試驗(yàn)方法和抑菌效果 抑菌金屬標(biāo)準(zhǔn) GB/T 24170.1-2009 表面抑菌不銹鋼 

抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了抗菌和抑菌評(píng)價(jià)方法的選擇原則和使用。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于具有抗菌和(或)抑菌功能產(chǎn)品的抗菌、抑菌效果的鑒定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其新版本( 包括所有的修改單)適用于本文件。

GB15979-次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

FZ/T 73023抗菌針織品

消毒技術(shù)規(guī)范(2002版) 衛(wèi)生部 (衛(wèi)法監(jiān)發(fā)(2002) 282號(hào))

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

抗菌antibacterial

采用化學(xué)或物理方法殺滅或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，可減少其數(shù)量以及活性的過(guò)程。

3.2

抑菌bacter iostasis .

采用化學(xué)或物理方法抑制或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的過(guò)程。

3.3

持續(xù)抗菌作用sustained antibacterial action

具有抗菌作用的消毒產(chǎn)品涂于物體表面，持續(xù)7d以上仍具有殺滅或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖作用。

3.4

中和劑neutralizer

在殺滅微生物試驗(yàn)中,用以消除試驗(yàn)微生物與消毒劑的混懸液中,以及微生物表面上殘留的消毒劑，

使其失去對(duì)微生物抑制和殺滅作用的試劑。

4評(píng)價(jià)方法的選擇原則.

4.1抗菌試驗(yàn) 與抑菌試驗(yàn)區(qū)別

抗菌試驗(yàn):測(cè)定抗菌產(chǎn)品對(duì)細(xì)菌和真菌的抗菌作用，試驗(yàn)過(guò)程中需要用中和劑終止殺菌作用。

抑菌試驗(yàn):測(cè)定抑菌產(chǎn)品對(duì)細(xì)菌和真菌的抑菌作用，試驗(yàn)過(guò)程中不需要使用中和劑終止抑菌作用。

4.2根據(jù)產(chǎn)品性能選擇合適的評(píng)價(jià)方法

4.2.1抑菌效果評(píng)價(jià)方 法的選擇原則

抑菌類(lèi)產(chǎn)品選擇抑菌效果評(píng)價(jià)方法。液體抑菌產(chǎn)品選擇懸液定量抑菌試驗(yàn)，膏體或半固體凝膠類(lèi)、

黏稠狀抑菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量抑菌試驗(yàn)，濕巾類(lèi)或其他自身含有抑菌成分的產(chǎn)品選擇載體抑菌試

驗(yàn)，肥皂類(lèi)固體抑菌產(chǎn)品選擇抑菌環(huán)試驗(yàn)，含有可溶性抑菌成分的紡織品選擇浸漬抑菌試驗(yàn)，含有持續(xù)

抑菌作用的抑菌洗液選擇滯留抑菌試驗(yàn)。

4.2. 2抗菌效果評(píng)價(jià)方 法的選擇原則

抗菌類(lèi)產(chǎn)品選擇抗菌效果評(píng)價(jià)方法。液體抗菌產(chǎn)品選擇懸液定量殺菌試驗(yàn)，凝膠狀或膏狀抗菌產(chǎn)品

選擇載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)，濕巾類(lèi)或其他自身含有抗菌成分的產(chǎn)品選擇載體殺菌試驗(yàn)，含有可溶性抗

菌成分的紡織品選擇浸漬抗菌試驗(yàn)。

含有不可溶抗菌成分的紡織品、無(wú)紡布、纖維等，經(jīng)鑒別不含可溶性抗抑菌成分后，采用燒瓶振蕩

試驗(yàn)。

含有不可溶抗菌成分的瓷磚、塑料、金屬、涂料等，采用貼膜試驗(yàn):對(duì)于涂于表面，干燥后具有持

續(xù)抗菌作用的產(chǎn)品，進(jìn)行持續(xù)抗菌試驗(yàn)。

5評(píng)價(jià)方法

5.1 抑菌效果

5.1.1懸液定 量抑菌試驗(yàn)

5.1.1.1 適用范圍

適用于液體抑菌制劑如衛(wèi)生洗液、抑菌噴霧劑等對(duì)微生物抑菌效果的測(cè)定。

5.1.1.2 試劑、培養(yǎng)基及器材

5.1.1.2.1試驗(yàn)菌株

金黃色葡萄球菌(ATCC 6538) 、大腸桿菌(8099) 、白色念珠菌(ATCC 10231) 及根據(jù)抑菌劑特

定用途所用的其他菌株。

5.1.1.2.2 試劑

稀釋液: 0.03 mo1/L 磷酸鹽緩沖液(PBS) (pH7.2~7.4) ，培養(yǎng)基:金黃色葡萄球菌和大腸桿

菌的培養(yǎng)使用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌的培養(yǎng)使用沙氏瓊脂培養(yǎng)基。

5.1.1.2.3 器材

恒溫水浴箱、計(jì)時(shí)器、II 級(jí)生物安全柜等。

5.1.1.3 試驗(yàn)步驟

取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0X 10 CFU/mL~4. 5X 10' CFU/mL菌懸液

備用。取無(wú)菌試管，先加入5. 0 m樣品(根據(jù)使用說(shuō)明書(shū)要求使用原液或稀釋液)，置20'C士1'C 水浴

中5min后，再加入0. 1 mL試驗(yàn)用菌懸液，迅速混勻并立即計(jì)時(shí)。待試驗(yàn)菌與樣品相互作用至說(shuō)明書(shū)的規(guī)

定時(shí)間，分別吸取1.0 mL試驗(yàn)菌與樣品混合液接種2個(gè)平皿，傾注培養(yǎng)基。菌量無(wú)法計(jì)數(shù)時(shí)，以PBS做10

倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋度分別吸取1.0 mL接種2個(gè)平皿，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。同時(shí)用PBS代替樣品，進(jìn)行

平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照回收菌落數(shù)在1.0X10* CFU/mL~9.0X 10* CFU/mL之間。 取同批次

PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36"C土1'C培養(yǎng)，細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察終

結(jié)果;白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算抑菌率。

5.1.1.4 抑菌率計(jì)算

x=1

Ao-A

x ...

(1)

Ao

式中:

X一抑菌率，%;

A一陽(yáng)性對(duì)照組回收菌量，單位為CFU/mL;

A-試驗(yàn)組回收菌量，單位為CFU/mL。

5.1.1.5 結(jié)果判定

抑菌率≥50%~90%，判有抑菌作用:抑菌率≥90%，判有較強(qiáng)抑菌作用。

5.1.2載體浸泡定 量抑菌試驗(yàn)

5.1.2.1適用范圍

適用于膏體或半固體凝膠類(lèi)、黏稠狀抑菌產(chǎn)品對(duì)微生物抑菌效果的測(cè)定。

5.1.2.2 試劑、培養(yǎng)基及器材

載體為10 mmX 10 mm脫脂白平紋布片，脫脂方法依照《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002版) 進(jìn)行，使用前壓

力蒸汽滅菌備用，電子天平(d=0.01g) ，其它同

5. 1.1.2。

5. 1.2.3 操作步驟

取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0X 10° CFU/mL~5. 0X 10' CFU/mL制成菌

懸液備用。用微量移液器滴染10 μ 1菌懸液于滅菌載體上，36"C 土1C烘干或室溫晾干備用。

按5 g/片的量稱(chēng)取樣品于無(wú)菌平皿內(nèi)，置20"C士1"C水浴5min，用無(wú)菌鑷子取染菌載體，使載體完

全浸沒(méi)于樣品中，立即計(jì)時(shí)。待染菌載體與樣品相互作用至說(shuō)明書(shū)的規(guī)定時(shí)間，分別取染菌載體加入5.0

mLPBS試管中，混勻，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，分別吸取1. 0 m樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，

每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可用PBS進(jìn)行10倍系列稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)

計(jì)數(shù)。取10. 0 g與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對(duì)照樣品浸泡2片染菌載體進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)

性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照回收菌量為1.0X10* CFU/片~9. 0X10* CFU/片。取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。

所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36°C土1°C培養(yǎng)，細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察結(jié)果;白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察

結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算抑菌率。

5.1.2.4抑菌率計(jì)算

x=

Ao-A

Ao

式中:

X一抑菌率，%;

Ao一對(duì)照樣品的平均菌落數(shù)，單位為CFU/片:

A-被試樣品平均菌落數(shù)，單位為CFU/片。

5.1.2.5 結(jié)果判定

抑菌率≥50%~90%，判有抑菌作用;抑菌率≥90%，判有較強(qiáng)抑菌作用。

5.1.3載體抑菌 試驗(yàn)

5.1.3.1適用范圍

適用于含溶出性抑菌成分的濕巾、無(wú)紡布口罩、衛(wèi)生巾、護(hù)墊、尿布等固體類(lèi)抑菌產(chǎn)品對(duì)微生物抑

菌效果的測(cè)定。

5.1.3.2 試劑、培養(yǎng)基及器材

見(jiàn)5.1.1.2。

二一

5.1.3.3 試驗(yàn)步驟

取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約10* CFU/mL~ 10° CFU/mL,制成菌懸液備用。

用滅菌剪刀在無(wú)菌條件下將試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品分別剪成20mmX30mm樣片備用。試驗(yàn)時(shí)滴加0.1mL

菌懸液。對(duì)照樣片染菌前需經(jīng)壓力蒸汽滅菌。取無(wú)菌平m，用無(wú)菌鑷子取2片試驗(yàn)樣片，勿重疊，置20"C

士1C水浴5min，在每一樣片上滴加0.1mL試驗(yàn)用菌懸液，立即計(jì)時(shí)。待試驗(yàn)菌與樣片接觸作用至說(shuō)明

書(shū)的規(guī)定時(shí)間，分別夾取染菌樣片加于5.0 mLPBS試管中，混勻。振蕩洗脫，分別吸取1.0 mL.樣液， 按

活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可10倍 系列

稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

同時(shí)用與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對(duì)照樣片2片代替試驗(yàn)樣片進(jìn)行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照，

陽(yáng)性對(duì)照回收菌量為1.0X10* CFU/片~9. 0X10' CFU/片;取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。

所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36"C土1C培養(yǎng)，細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h、白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察終

結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算抑菌率。

5.1.3.4抑菌率計(jì)算

見(jiàn)式(2)。

5.1.3.5結(jié)果判定

抑菌率≥50%~90%，判有抑菌作用;抑菌率≥90%，判有較強(qiáng)抑菌作用。

5.1.4抑菌環(huán)試驗(yàn)

5.1.4.1適用范圍

適用于含溶出性抑菌物質(zhì)，可制成直徑為5 mm片狀物的固體抑菌產(chǎn)品的抑菌效果鑒定;也可用于鑒

別抗抑菌樣品中是否含有可溶性抑菌物質(zhì)。

5.1.4.2 試劑、培養(yǎng)基及器材

游標(biāo)卡尺，其它見(jiàn)5. 1.1.2

5.1.4.3 試驗(yàn)步驟

將試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，稀釋至5. 0X10° CFU/mL~5. 0X 10° CFU/mL 備用。

抑菌片的制備:溶出性固體抑菌產(chǎn)品，直接制成直徑為5 mm，厚度不超過(guò)4 mm圓片(塊)，每4片

為一組。

陰性對(duì)照樣片的制備:取同種材質(zhì)不含抑菌成分的樣本，制成與試驗(yàn)組大小相同的圓片(塊)。

用無(wú)菌棉拭子蘸取濃度為5.0X10° CFU/mL~5. 0X 10”CFU/mL試驗(yàn)菌懸液，在適宜的培養(yǎng)基平板表

面均勻涂抹3次。每涂抹1次，平板應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)60°，后將棉拭子繞平板邊緣涂抹- -周。 蓋好平皿，置室溫

干燥5min。

每次試驗(yàn)貼放1個(gè)染菌平板，每個(gè)平板貼放4片試驗(yàn)樣片，1片陰性對(duì)照樣片，共5片。用無(wú)菌鑷子

取樣片貼放于平板表面，陰性對(duì)照樣片貼于平板中心位置，試驗(yàn)樣片貼于四周，貼放好后，用無(wú)菌鑷子

輕壓樣片，使其緊貼于平板表面。各樣片中心之間相距25 mm以上，與平板的周緣相距15 mm以上。蓋好

平板，置36C土1°C培養(yǎng)16h~ 18h觀察結(jié)果，試驗(yàn)重復(fù)3次。

用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)的直徑( 包括貼片)并記錄，測(cè)量抑菌環(huán)時(shí)，應(yīng)選均勻而完全無(wú)菌生長(zhǎng)的抑

菌環(huán)進(jìn)行，測(cè)量其直徑應(yīng)以抑菌環(huán)外沿為界。

5. 1.4.4 結(jié)果判定.

陰性對(duì)照樣片應(yīng)無(wú)抑菌環(huán)產(chǎn)生,試驗(yàn)樣品抑菌環(huán)直徑> 7 mm者,判為有抑菌作用:抑菌環(huán)直徑≤7 mm

者，判為無(wú)抑菌作用。

3次重復(fù)試驗(yàn)(共12個(gè)樣片)均有抑菌作用，則判為合格。

5.1.5浸漬抑菌試驗(yàn)

5. 1.5.1 適用范圍.

適用于溶出性抑菌織物(如抑菌毛巾、口罩、內(nèi)衣等)抑菌效果的測(cè)定。

5.1.5.2 試劑、培養(yǎng)基及器材

5. 1.5.2.1 試驗(yàn)菌株見(jiàn)5.1.1.2.1

5.1.5.2.2 試樣

在距試樣布邊10 cm以上、離布端1 m以上部位，剪取直徑為5 cm的圓形試樣若干，取3份試樣分別

裝于3個(gè)錐形瓶中，蓋好瓶口備用(需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類(lèi)別及織物織法而定，以能吸收1 mL菌液

且錐形瓶中不留殘液為度)。另同法剪取與試樣相同材質(zhì)但不含抑菌劑對(duì)照織物若干，取2份分別裝于2

個(gè)錐形瓶中，蓋好瓶口，121C 滅菌15min備用。

5. 1.5.2.3 試劑和培養(yǎng)基

0. 03 mol/L PBS (pH7.2~7.4)，肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、沙氏培養(yǎng)基。

5.1.5.2.4菌懸液的制備

用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，36°C土1C培養(yǎng)24h,取典型的菌落移種到含

肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，36"C土1°C培養(yǎng)24h,用肉湯對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行系列稀釋?zhuān)咕鷳乙旱暮繛?.0

X 105 CFU/mL~5. 0X 10 CFU/mL。

5.1.5.3試驗(yàn) 步驟

分別取1mL菌懸液加入2份準(zhǔn)備好的錐形瓶?jī)?nèi)試樣和1份對(duì)照織物上，確保其均勻分布，且錐形瓶中

不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)造成細(xì)菌死亡。分別在-一個(gè)盛有已接種菌懸液的試樣和對(duì)照織物的錐

形瓶中加入100 mLPBS， 置渦旋振蕩器上振蕩lmin洗滌細(xì)菌，分別吸取1.0 mL樣液或10倍系列稀釋液接

種2個(gè)平皿，作為“0”接觸時(shí)間樣本和對(duì)照織物上的細(xì)菌數(shù)。

將另一個(gè)裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36"C士1°C培養(yǎng)20h士2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩

器上振蕩1min洗滌細(xì)菌，分別吸取1.0 mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個(gè)平皿，作為試驗(yàn)組。

陰性對(duì)照組，試樣不接種菌懸液，在“0”接觸時(shí)間加入100 mLPBS,置渦旋振蕩器上振蕩lmin取樣，

接種平皿。

陽(yáng)性對(duì)照組，另取1個(gè)裝有對(duì)照織物的錐形燒瓶，接種1 mL菌懸液后，在36°C士1C培養(yǎng)20 h土2h,

加入100 mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩lmin洗滌細(xì)菌，分別吸取1.0 mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個(gè)平

皿。將陰性和陽(yáng)性對(duì)照樣本與試驗(yàn)組樣本一并放36°C士1"C培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，試驗(yàn)重復(fù)3次。

5.1.5.4計(jì)算抑菌率

X=

B或C或[(B +C)/2]-A

1006丁.

B或C或[(B +C)]/2

x .....

式中:

X一抑菌率，%;

A一試驗(yàn)組試樣上的細(xì)菌數(shù)，單位為CFU/mL;

cin.com

B-“0”接觸時(shí)間試樣上的細(xì)菌數(shù)，單位為CFU/mL;

C-“0”接觸時(shí)間對(duì)照織物上的細(xì)菌數(shù)，單位為CFU/mL;

如果“B"和“C”差別較大時(shí)，取較大值:如果“B"和“C”差別不大時(shí)，取平均值。

5.1.5.5 結(jié)果判定

試驗(yàn)成立條件要求:“0” 接觸時(shí)間對(duì)照織物的平均回收菌量為1X 10' CFU/mL~5X 10* CFU/mL;陰

性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照菌數(shù)比0接觸時(shí)間的菌數(shù)明顯增加。

各次試驗(yàn)的抑菌率均≥50%，即可判定該樣片具有抑菌作用。

5.1.6 滯留抑菌效果試驗(yàn)

5.1.6. 1適用范圍

適用于有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類(lèi)抑菌產(chǎn)品的滯留抑菌效果鑒定。

5.1.6.2 試劑、培養(yǎng)基及試驗(yàn)器材

試驗(yàn)菌株:金黃色葡萄球菌(ATCC 27217)

試驗(yàn)產(chǎn)品:試驗(yàn)品為25套按順序編號(hào)的樣品。每套2瓶，-瓶為測(cè)試樣品，另一瓶為不含抗(抑)

菌劑的對(duì)照樣品。

不含抑菌劑的用品25瓶(試驗(yàn)調(diào)整階段用)。

胰蛋白酶大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB) 、胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA) 、羊血、經(jīng)脫纖維處理、0. 075

mol/L的磷酸鹽緩沖液、70%酒精、金屬筒(直徑2.2 cm、高度3 cm) 、-次性接種環(huán)(直徑4 mm)、

小塑料碗(直徑2.2 cm， 高2.5 mm,)、膠帶(Darapore, 3M公司生產(chǎn))、尼龍刮菌棒、聚乙二醇單辛

基苯基醚(曲拉通X-100; Triton-X 100 ) 500 mL、外用軟膏、玻璃彎棒、皮膚消毒劑等。 .

5.1.6.3 試驗(yàn)步驟

5. 1.6.3.1 調(diào)整階段

試驗(yàn)開(kāi)始前7d至14d，受試者 使用不含抗(抑)菌成分的香皂、洗發(fā)水和沐浴液進(jìn)行日常的洗手、

洗澡，此階段持續(xù)至少7d，但不超過(guò)14d。

5.1.6.3.2清洗階段

清洗階段共3d,受試者每天用有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類(lèi)樣品清洗--側(cè)前臂，用對(duì)照樣品清洗另

-側(cè)前臂，清洗過(guò)程如下:

先清洗左臂，用水溫為35"C ~37C的流動(dòng)水潤(rùn)濕前臂內(nèi)側(cè);取樣液3 mL于手心中;從手腕至臂肘

上下涂擦60s;用流動(dòng)的清水沖洗前臂15s， 不要搓擦;用紙巾沾干前臂，不要搓擦;用不含抑菌成分

的對(duì)照樣品重復(fù)以上步驟清洗右臂;按上面所描述的試驗(yàn)步驟每日清洗前臂3次，每次間隔至少1h，在

后一次清洗之后，需記錄好時(shí)間，在12h之 后,進(jìn)行滯留效果檢測(cè)。在第9次清洗前臂以后，受試者不

能洗澡、淋浴或洗凈前臂，直到試驗(yàn)結(jié)束。

5.1.6.3.2清洗階段

清洗階段共3d,受試者每天用有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類(lèi)樣品清洗--側(cè)前臂，用對(duì)照樣品清洗另

一.側(cè)前臂，清洗過(guò)程如下:

先清洗左臂，用水溫為35"C ~37°C的流動(dòng)水潤(rùn)濕前臂內(nèi)側(cè):取樣液3 mL于手心中;從手腕至臂肘

上下涂擦60s;用流動(dòng)的清水沖洗前臂15s， 不要搓擦;用紙巾沾干前臂，不要搓擦;用不含抑菌成分

的對(duì)照樣品重復(fù)以上步驟清洗右臂;按上面所描述的試驗(yàn)步驟每日清洗前臂3次，每次間隔至少1h，在

后一次清洗之后，需記錄好時(shí)間，在12h之后,進(jìn)行滯留效果檢測(cè)。在第9次清洗前臂以后，受試者不

能洗澡、淋浴或洗凈前臂，直到試驗(yàn)結(jié)束。

5.1.6. 3.3試驗(yàn)階段

后一次清洗后的12h或24h， 將在受試者每只前臂.上劃出一個(gè)試驗(yàn)區(qū)，對(duì)試驗(yàn)區(qū)進(jìn)行接種、封包

和回收存活細(xì)菌,具體步驟如下:

將金黃色葡萄球菌(ATCC 27217)連續(xù)轉(zhuǎn)種3代,取第3代培養(yǎng)物接種于胰蛋白大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)

中，在36°C土1C的條件下培養(yǎng)20h土2h。然后用TSB適當(dāng)稀釋菌懸液，使菌懸液濃度約為10'CFU/mL~

10° CFU/mL。

接種:在受試者的每只前臂中間部位(不要在手腕和肘皺褶處)，用帶有印墨直徑為3.00 cm的玻

璃量筒扣在皮膚.上，劃分出一個(gè)試驗(yàn)區(qū)。使用加樣器取10μL上述菌懸液，接種于前臂試驗(yàn)區(qū)(菌落數(shù)

為10° CFU/試驗(yàn)區(qū)~107 CFU/試驗(yàn)區(qū))，用一次性接種環(huán)，把接種物涂成- - 圓形，使其與試驗(yàn)區(qū)邊緣應(yīng)

有4 mm~5 mm的距離。

封包:細(xì)菌接種后立即用小塑料碗扣于染菌區(qū)上面,再用膠帶將小塑料碗固定在皮膚上，記錄封包

的時(shí)間。

回收存活細(xì)菌:接種后2h士5min對(duì)前臂上接種的區(qū)域進(jìn)行取樣。將金屬筒放置于試驗(yàn)區(qū)中間部位，

不要接觸到蓋有印墨的邊緣。將1 mL含0.1% Triton X 100的0. 075 mol/L磷酸鹽緩沖液吸移至金屬筒內(nèi)，

用尼龍刮菌棒刮洗金屬筒罩住區(qū)域內(nèi)的皮膚60s,將筒內(nèi)液體吸移至試管內(nèi)，再加1mL含0.1%Triton

X-100的0. 075 mol/L磷酸鹽緩沖液，對(duì)該區(qū)域內(nèi)的皮膚進(jìn)行第二次刮洗30s，將第二次擦洗的液體，注

入含次刮洗液體的試管中。

實(shí)驗(yàn)區(qū)試驗(yàn)后的消毒處理:對(duì)抑菌樣品組清洗后的實(shí)驗(yàn)區(qū)采樣之后,需用70%的酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)進(jìn)行消

毒。然后對(duì)無(wú)抑菌成分的對(duì)照組清洗后的實(shí)驗(yàn)區(qū)以同樣方法進(jìn)行采樣、消毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用皮膚消毒

劑對(duì)兩只前臂進(jìn)行消毒處理，處理后清水沖洗，擦干，再涂少量的軟膏。

接種與培養(yǎng):對(duì)每-一個(gè)取樣進(jìn)行接種，以0.0375mol/L磷酸鹽緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行10倍系列稀釋?zhuān)x

適當(dāng)稀釋度取0.1 mL接種于2個(gè)含5%羊血的TSA平板表面，用玻璃彎棒涂勻，在36C土1°C的培養(yǎng)箱中培

養(yǎng)48h士4h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。

以試驗(yàn)同批次的稀釋液、培養(yǎng)基等分別設(shè)陰性對(duì)照。

5.1.6. 4抑菌率的計(jì)算

A- B

X=.

.x .

... (4) 

A

式中:

X--抑菌率%

A--對(duì)照平均菌落數(shù)，單位為CFU/ 試驗(yàn)區(qū)

B--試驗(yàn)平均菌落數(shù)，單位為CFU/ 試驗(yàn)區(qū)

5.1.6.5判定標(biāo)準(zhǔn)

各次試驗(yàn)陰性對(duì)照菌無(wú)菌生長(zhǎng)。

實(shí)驗(yàn)不得少于16人次，抑菌率均≥50%，可判定該產(chǎn)品在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)有滯留抑菌作用。

5.2 抗菌效果

5.2.1懸液定量殺菌試驗(yàn)

5.2.1.1 適用范圍.

適用于液體抗菌產(chǎn)品(如液體抗菌液、抗菌噴霧劑等)對(duì)微生物抗菌效果的測(cè)定。

5.2. 1.2 試劑、培養(yǎng)基及器材

中和劑(用PBS配制)，其它見(jiàn)5. 1. 1.2。，

5.2.1.3菌懸液配制●

取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5. 0X 10° CFU/mL~4. 5X 10" CFU/mL菌懸液

備用。

5.2. 1.4 中和劑鑒定試驗(yàn)

5.2.1.4.1 分組

第1組: 5.0 mL中和劑+ 0.1 mL菌懸液→培養(yǎng)

第2組: (0.5 m抗菌劑+ 4.5 mL中和劑) + 0.1 m菌懸液→培養(yǎng)

第3組: 5.0 mL稀釋液+0.1 mL菌懸液→培養(yǎng)

第4組:稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)

5.2.1.4.2步驟

根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備試管和平皿，進(jìn)行編號(hào)。

第1組:取5. 0 mL中和劑，置20'C 土1'C水浴中10min后，加入0. 1 mL試驗(yàn)菌懸液，混勻，作用10min, .

用中和劑做10倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋度分別吸取1.0 mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第2組:取4.5 mL中和劑于試管內(nèi)，加入0.5 mL抗菌劑，混勻，置20C 土1°C水浴中10min制成中和.

產(chǎn)物，加入0. 1 mL試驗(yàn)菌懸液，混勻，作用10min,用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋度分別吸

取1.0 mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第3組:取5. 0 mLPBS，置20"C 士1'C水浴中10min,加入0. 1 m試驗(yàn)菌懸液，混勻，作用10min,用

PBS做10倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋度分別吸取1.0 mL接種2個(gè)平皿，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第4組:分別吸取稀釋液(PBS) 、中和劑各1. 0mL于同- -無(wú)菌平皿內(nèi)，倒入上述試驗(yàn)同批次的培養(yǎng)

基15 mL~20 mL，作為陰性對(duì)照組培養(yǎng)觀察。

5.2.1.4.3結(jié)果判定

第1、2、3組有相似量試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，且菌量在1.0X 10' CFU/mL ~9.0X 10' CFU/mL;計(jì)算組間菌落數(shù)

誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過(guò)15%;第4組無(wú)菌生長(zhǎng)，否則，說(shuō)明試劑有污染，應(yīng)更換無(wú)污染的

試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。

試驗(yàn)重復(fù)3次，每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。

5.2. 1.5 試驗(yàn)步驟

取無(wú)菌試管，先加入5. 0 mL抗菌劑(說(shuō)明書(shū)規(guī)定的使用濃度)，置20"C士1'C水浴中5min后，再加

入0.1 mL試驗(yàn)用菌懸液，迅速混勻并立即計(jì)時(shí)。

待試驗(yàn)菌與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間(以說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間為T(mén)，時(shí)間分別為0. 5T, T，1.5T) ,

分別吸取0.5 mL試驗(yàn)菌與抗菌劑混合液加于4.5 m中和劑中，混勻。

各管試驗(yàn)菌與抗菌劑混合液經(jīng)中和劑作用10min后，分別吸取1.0 mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè).

定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可用PBS進(jìn)行10倍系列稀釋后，再

進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

同時(shí)用PBS代替消毒液，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照回收菌落數(shù)在1.0X 10* CFU/mL~

9.0X 10' CFU/mL。取同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。

所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36°C土1'C培養(yǎng)，對(duì)細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察終結(jié)果;對(duì)白色念珠菌

需培養(yǎng)72h觀察終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算殺菌率。

5.2. 1. 6殺菌率計(jì)算

A- B

X=

.x

(5)

A

式中:

X一殺菌率，%;

A一陽(yáng)性對(duì)照組回收菌量，單位為CFU/mL;

B一試驗(yàn)組回收菌量，單位為CFU/mL.

5.2.1.7 結(jié)果判定

說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用;說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥99%,判為較強(qiáng)抗菌作

用。

5.2.2載體 浸泡定量殺菌試驗(yàn)

5.2.2.1適用范圍.

適用于粘稠狀(半固體)抗菌產(chǎn)品如抗菌洗手液、抗菌沐浴露、抗菌凝膠、膏狀抗菌產(chǎn)品等對(duì)微生

物抗菌效果的鑒定。.

5.2.2.2 試劑、培養(yǎng)基及器材

中和劑(PBS配制)，其它見(jiàn)5. 1.2.2。

5.2. 2.3染菌載體制備

取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5X 10° CFU/mL~ 5X 107 CFU/mL制成菌懸液

備用。用微量移液器滴染10μ 1菌懸液于滅菌載體上，36C土1C烘干或室溫晾干備用。

5.2.2.4中和劑鑒定試驗(yàn)

5.2.2.4. 1試驗(yàn) 分組

第1組: 5.0 mL中和劑+染菌載體→培養(yǎng)

第2組: ( 含抗菌劑的載體+ 5. 0 mL中和劑) +染菌載體→培養(yǎng)

第3組: 5.0 mL稀釋液+染菌載體→培養(yǎng)

第4組:稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)

5.2. 2. 4.2試驗(yàn) 步驟

根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備試管和平皿，依次進(jìn)行編號(hào)。

第1組:取5. 0 mL中和劑于無(wú)菌平皿中，置20C土1'C水浴5min,加入1片染菌載體，作用10min,取

出菌片放入5.0 m中和劑試管內(nèi)，作用10min后，置渦旋振蕩器上振蕩1min或在手掌上用力振打80次，.

將試驗(yàn)菌洗下，用中和劑做10倍系列稀釋后，選擇適宜稀釋度，分別吸取1. 0 m接種于2個(gè)平皿中，做

活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第2組:取5. 0 mL中和劑于無(wú)菌平皿內(nèi)，加入1片沾有抗菌樣本的載體，混勻，置20C士 1°C水浴作

用10min制成中和產(chǎn)物。再用無(wú)菌鑷子取1片染菌載體，浸于中和產(chǎn)物中作用10min后，用無(wú)菌鑷子取出

染菌載體移入含5.0 mL中和產(chǎn)物試管中，作用10min， 振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀

釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0 m接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第3組:取5. 0 mLPBS于無(wú)菌平皿中，置20"C土1'C水浴5min，加入1片染菌載體，作用10min，取出

菌片放入5.0 mLPBS試管內(nèi)，作用10min后，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，用PBS做10倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋

度分別吸取1.0 mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

第4組:分別吸取稀釋液(PBS)與中和劑各1. 0mL于同-無(wú)菌平皿內(nèi)，倒入同批次的培養(yǎng)基15~20

mL，培養(yǎng)觀察。

5.2.2.4.3 結(jié)果判定

第1、2和3組有相似量試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，且菌量在1.0X 10 CFU/片~9.0X 10 CFU/片。計(jì)算組間菌落數(shù)

誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過(guò)15%。第4組無(wú)菌生長(zhǎng)，否則，說(shuō)明試劑有污染，應(yīng)更換無(wú)污染的

試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)重復(fù)3次，每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。

5.2.2.5試驗(yàn)步驟

按5 g/片的量稱(chēng)取抗菌樣品于無(wú)菌平皿內(nèi)，置20°C 士1°C水浴5min,用無(wú)菌鑷子取染菌載體，使載

體完全浸沒(méi)于抗菌樣品中，立即計(jì)時(shí)。

待染菌載體與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間(以說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間為T(mén),時(shí)間分別為0.5T,T,1.5T)，

分別取染菌載體加入5.0 m中和劑試管中，混勻。

經(jīng)中和劑作用10min后，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，分別吸取1.0 mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存

活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可用PBS進(jìn)行系列10倍稀釋后，再進(jìn)行

活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。